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中法聯合開發即用型三通道數字PCR新冠病毒核酸檢測方案抗擊全球新冠疫情。日前，Stilla Technologies發布：基于3色NaicaTM微滴芯片式數字PCR的2019-nCoV新冠病毒的核酸檢測方案，并公布該解決方案的性能數據，此方案由法國Stilla Technologies、艾普拜生物科技（蘇州）有限公司和我司北京深藍云生物科技有限公司共同開發完成。

 

Stilla Technologies公司發布信息原文鏈接：

https://www.stillatechnologies.com/a-3-color-crystal-digital-pcr-kit-for-detection-of-covid-19/

北京深藍云生物科技有限公司發布信息鏈接：

http://www.cycloudbio.com/product/36748.html

 

北京深藍云生物科技有限公司作為Stilla Technologies中國技術示范與服務中心，給出如下中文翻譯：


▶  一步式RT-dPCR方法2019-nCoV
 

（COVID-19）核酸檢測試劑盒說明
 

2019-nCoV（COVID-19）新冠病毒已被世界衛生組織宣布為國際關注的突發公共衛生事件。為了促進衛生當局的行動，開發可靠的檢測試劑至關重要。
 

蘇州艾普拜生物（位于江蘇醫療器械科技產業園）利用已公開的2019-nCoV和其他SARS相關的病毒序列，以及特異性檢測2019-nCoV的PCR檢測方法(Chan et al.，2020)，開發基于3色NaicaTM微滴芯片式數字PCR平臺的2019-nCoV（COVID-19）一步法RT-digital PCR的核酸檢測試劑盒（圖1），利用FAM標記探針檢測2019-nCoV（COVID-19）新冠病毒RNA正鏈的ORF1ab基因、HEX標記探針檢測N基因、CY5標記的內參基因（人類看家基因），可同時檢測兩個獨立的2019-nCoV（COVID-19）新冠病毒序列，同時可監控RNA樣本質量和PCR擴增的有效性（圖2）。

 

圖1：即用型2019-nCoV（COVID-19）一步法RT-digital PCR的核酸檢測試劑盒，包含在NaicaTM微滴芯片式數字PCR平臺使用的全部試劑。（* 僅供科研使用）

 

圖2：NaicaTM  Crystal Miner分析軟件自動生成的2D（左），3D點圖（右）和微滴原始圖像。檢測樣本為試劑盒的陽性對照。
 

FAM和HEX標記的探針特異地靶向2019-nCoV（COVID-19）基因組的ORF1ab和N基因，Cy5標記的探針檢測人類看家基因。
 

閾值線由Crystal Miner軟件自動生成，也可參照試劑盒說明書設定。

 

▶ 2019-nCoV檢測的特異性和靈敏度
 

以1ng人類RNA為背景，將合成的2019-nCoV（COVID-19）靶標序列連續稀釋七個點進行檢測并重復三次。結果表明，在所有測試樣本中，2019-nCoV（COVID-19）的ORF1ab基因(FAM)從80個拷貝到5個拷貝，N基因(HEX)從120個拷貝到7個拷貝均能檢測到。對樣本進一步稀釋，上述兩種基因在每25µl反應中可檢測到2個拷貝。（圖3）同時以人RNA為陰性對照（15個孔）進行檢測，無假陽性結果。

圖3：2019-nCoV（COVID-19）一步法RT-digital PCR核酸檢測試劑盒的靈敏度評測。
 

檢測在1ng人類RNA背景下合成的2019-nCoV（COVID-19）靶標序列的系列稀釋液。

豎線表示置信度為95%時平均值的置信區間。

空圓圈表示未檢測到2019-nCoV（COVID-19）。

 

▶ 應用亮點
 

★ 2019-nCoV（COVID-19）一步法RT-digital PCR的核酸檢測試劑盒是即用型核酸檢測試劑盒，在一個反應中即可完成兩個2019-nCoV（COVID-19）靶標序列進行絕對定量檢測，同時檢測內參基因監控RNA樣本質量和PCR擴增有效性。

★ 使用NaicaTM微滴芯片式數字PCR平臺進行的2019-nCoV（COVID-19）靶標序列進行特異性和靈敏度檢測，可觀察到低至5個拷貝的ORF1ab基因和7個拷貝的N基因。

★以人RNA為陰性對照，15個樣本均未觀察到假陽性。

 

【參考資料】

1. Chan JF, Yip CC, To KK, Tang TH, Wong SC, Leung KH, Fung AY, Ng AC, Zou Z, Tsoi HW, Choi GK, Tam AR, Cheng VC, Chan KH, Tsang OT, Yuen KY. Improved molecular diagnosis of COVID-19 by the novel, highly sensitive and specific COVID-19-RdRp/Hel real-time reverse transcription-polymerase chain reaction assay validated in vitro and with clinical specimens. J Clin Microbiol. 2020 Mar 4.

2. Stilla Technologies. A 3-color Crystal Digital PCR kit for detection of COVID-19. 

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