022020 營養(yǎng)瓊脂(普通肉湯瓊脂培養(yǎng)基)

　　(Nutrient Agar)

　　用 途：

　　營養(yǎng)瓊脂(普通肉湯瓊脂培養(yǎng)基)用于細菌總數(shù)測定、保存菌種及純培養(yǎng)，也可用于消毒效果測定(GB/T4789.28-2003 中4.7 ，GB/T4789.2-2003，GB15979-2002和GB15981-1995，ISO標準)。

　　原 理：

　　蛋白胨和牛肉膏粉提供氮源、維生素、氨基酸和碳源；氯化鈉能維持均衡的滲透壓；瓊脂是培養(yǎng)基的凝固劑。

　　配方(每升)：

　　蛋白胨10g

　　牛肉膏粉3g

　　氯化鈉 5g

　　瓊脂15g

　　最終pH 7.3±0.2

　　使用方法：

　　1、 稱取營養(yǎng)瓊脂(普通肉湯瓊脂培養(yǎng)基)33g，加入蒸餾水或去離子水1 L，攪拌加熱煮沸至完全溶解，分裝三角瓶，121℃高壓滅菌15min，備用。

　　2、 (食品)以無菌操作稱取檢樣25克(或25mL)，放入含有225mL滅菌生理鹽水或其他稀釋液的玻璃三角瓶中(瓶內(nèi)預(yù)置適當(dāng)數(shù)量的玻璃珠)，充分振搖，即為1：10的均勻稀釋液。依次做1：100，1：1000……稀釋液。

　　3、 根據(jù)對樣品污染情況的估計，選擇2—3個合適的稀釋度，分別在做10倍稀釋的同時，吸取1mL稀釋液于滅菌平皿中，每個稀釋度做2個平皿。

　　4、 稀釋液移入平皿后應(yīng)及時將涼至46℃左右的培養(yǎng)基注入平皿約15mL，并轉(zhuǎn)動平皿使混合均勻，同時將營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基傾入加有1mL稀釋液的滅菌平皿內(nèi)作空白對照。待瓊脂凝固后，倒置于36±1℃溫箱中培養(yǎng)48±2h。

　　5、 觀察結(jié)果。

　　6、 菌落計數(shù)方法：

　　做平板菌落計數(shù)時，可用肉眼觀察，必要時用放大鏡檢查，以防遺漏，在計下各平板的菌落數(shù)后，求出同稀釋度的各平板平均菌落總數(shù)。

　　7、 菌落計數(shù)的報告：

　　選取菌落數(shù)在30—300之間的平板作為菌落總數(shù)測定標準。一個稀釋度使用兩個平板，應(yīng)采用兩個平板平均數(shù)，其中一個平板有較大片狀菌落生長時，則不宜采用，而應(yīng)以無片狀菌落生長的平板作為該稀釋度的菌落數(shù)，若片狀菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均勻，即可計算半個平板后乘以2以代表全皿菌落數(shù)。平皿內(nèi)如有我鏈狀菌落生長時(菌落之間無明顯界線)，若僅有一條鏈，可視為一個菌落;如有不同來源的幾條鏈，則應(yīng)將每條鏈視為一個菌落計

　　A：稀釋度的選擇：

　　應(yīng)選擇平均菌落數(shù)在30—300之間的稀釋度，乘以稀釋倍數(shù)報告之(見附表)。

　　若有兩個稀釋度.其生長的菌落數(shù)無均在30—300之間，則視兩者之比如何來決定。若其比值小于或等于2，則應(yīng)報告其平均數(shù);若大于2則報告其較小的數(shù)字(見表中例2及3)。

　　若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均大于300則應(yīng)按稀釋度最高的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報告之(見表中例4)。

　　若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均小于30，則應(yīng)按稀釋度最底的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報告之(見表中例5)。

　　若所有稀釋度均無菌落生長，則以小于1乘以最底稀釋倍數(shù)報告之(見表中例6)。

　　若有稀釋度的平均菌菌落數(shù)均不在30—300之間，其中一部分大于300或小于30時，則以最接近30或300的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報告之(見表中例7)。

　　菌落數(shù)的報告：

　　菌落數(shù)在100以內(nèi)時，按其實有數(shù)報告，大于100時，采用二位有效數(shù)字，在二位數(shù)字后面的有效數(shù)值，以四舍五入法計算。為了縮短數(shù)字后面的零數(shù)，也可以用10的指數(shù)來表示(見表中“報告方式欄”)。

　　稀釋度選擇及菌落數(shù)報告方式

　　質(zhì)量控制：

　　本品接種下列菌株，置于36±1℃溫箱中培養(yǎng)48±2h，結(jié)果如下：

　　貯 存：貯存于避光、陰涼干燥處，用后立即旋緊瓶蓋。貯存期三年。

　　規(guī) 格： 250g

　　參考文獻:

　　1. GB15979-2002 中華人民共和國國家標準 一次性使用衛(wèi)生用品衛(wèi)生標準

　　2. GB/T 4789 .2—2003 中華人民共和國國家標準 食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗標準 菌落總數(shù)測定

　　3. GB15981-1995 中華人民共和國國家標準 消毒與滅菌效果的評價方法與標準

　　4. ISO 21528-1;2004 Microbiology of food and animal feeding stuffs-----Horizontal methods for the detection and enumeration of Enterobacteriaceae-----Part1 Detection and enumeration by MPN technique with pre-enrichment

　　5. ISO 21528-1;2004 Microbiology of food and animal feeding stuffs-----Horizontal methods for the detection and enumeration of Enterobacteriaceae-----Part 2 Colony-count method

　　6.ISO 6579：2002 Microbiology of food and animal feeding stuffs-----Horizontal method for the detection of Salmonella spp.

　　7.ISO 10273-2003 Microbiology of food and animal feeding stuffs-----Horizontal method for the detection of presumptive pathogenic Yersinia enterocolitica

　　8.ISO6785-2001 Milk and milk products-----Detection of Salmonella spp