022222 結(jié)晶紫中性紅膽鹽葡萄糖瓊脂(VRBGA)

　　(Violet Red Bile Glucose Agar)

　　用 途：

　　結(jié)晶紫中性紅膽鹽葡萄糖瓊脂用于阪崎腸桿菌的選擇性分離培養(yǎng)以及腸道菌的計(jì)數(shù)和鑒別(SN/T 1632.1-2005)。

　　原 理：

　　蛋白胨和酵母抽取物提供碳氮源和微量元素;乳糖和葡萄糖是可發(fā)酵的糖類;氯化鈉可維持均衡的滲透壓;3號(hào)膽鹽和結(jié)晶紫抑制革蘭氏陽(yáng)性菌，特別抑制革蘭氏陽(yáng)性桿菌和糞鏈球菌;中性紅為pH指示劑。

　　培養(yǎng)基配方(每升)：

　　酵母抽取物 　3g

　　蛋白胨 　7g

　　氯化鈉 　5g

　　3號(hào)膽鹽 1.5g

　　乳糖 　 10g

　　葡萄糖　　10g

　　中性紅 　0.03g

　　結(jié)晶紫 　0.002g

　　瓊脂 　15g

　　最終pH 7.4±0.2

　　使用方法：

　　1、稱取結(jié)晶紫中性紅膽鹽葡萄糖瓊脂51.5g，加入蒸餾水或去離子水1 L，攪拌加熱煮沸至完全溶解，分裝三角瓶，備用(不得超過3h)。

　　2、取奶粉樣品333克按MPN三管法分別取100克、10克和1克分裝在各三個(gè)2000ml、250ml和100ml的三角瓶中，在三角瓶中已裝有經(jīng)45℃預(yù)熱的9/10(樣品為1/10)的無菌蒸餾水，搖勻，在36±1℃培養(yǎng)18-22小時(shí)(SN和FDA方法)。

　　3、各取10ml上述懸浮液加到裝有90mlEE肉湯(022160)的150ml的三角瓶中，在36±1℃增菌培養(yǎng)18-22小時(shí)。

　　4、用劃線或涂布法把混勻的EE肉湯接種到VRBGA瓊脂平板上，36±1℃培養(yǎng)18-22小時(shí)。

　　5、從VRBGA平板上挑取5個(gè)可疑菌落分別接種到5個(gè)TSA平板，25±1℃培養(yǎng)48-72小時(shí)。

　　6、可使用MicrogenTMGN-ID或API20E或生化管試驗(yàn)，對(duì)疑似阪崎腸桿菌菌落進(jìn)行生化鑒定。

　　7、奶粉以外的其它樣品，以無菌手續(xù)取樣品25g或25mL，加入含225mL無菌磷酸鹽緩沖液(或生理鹽水)的三角瓶?jī)?nèi)，充分振搖或用均質(zhì)器均質(zhì)1min成1：10稀釋液，然后以1：10繼續(xù)稀釋，選擇三個(gè)適宜的連續(xù)稀釋度，每個(gè)稀釋度接種兩個(gè)平皿，傾注加熱溶解并冷至45℃左右的培養(yǎng)基。

　　8、觀察結(jié)果。

　　質(zhì)量控制：

　　本品傾注平皿后呈暗紫紅色，下列菌株接種后于36±1℃培養(yǎng)18—24h生長(zhǎng)情況如下表。

　　貯 存：貯存于避光、陰涼干燥處，用后立即旋緊瓶蓋。貯存期三年。

　　規(guī) 格：250g

　　參考文獻(xiàn):

　　1.SN/T 1632.1-2005 中華人民共和國(guó)出入境檢驗(yàn)檢疫行業(yè)標(biāo)準(zhǔn) 奶粉中阪崎腸桿菌檢驗(yàn)方法 第一部分:分離與計(jì)數(shù)標(biāo)準(zhǔn)