071800 蠟樣芽胞桿菌胞桿菌生生化鑒定盒(8種×10次)

　　一)整套試劑及用品

　　鑒定生化反應的8種試劑(表1)、8瓶0.85%無菌生理鹽水、1瓶1McFarland的濁度管、8支一次性吸管。

　　二)生化管的使用方法

　　開啟西林瓶前，用75%酒精棉消毒西林瓶表面，在無菌條件下，按鋁蓋上的箭頭方向打開鋁蓋，撕開鋁蓋，打開西林瓶

　　膠塞(如圖1)。所有的西林瓶在使用后均高壓滅菌后方可棄去。

　　三)蠟樣芽胞桿菌生化鑒定盒的詳細使用方法

　　蠟樣芽胞桿菌為革蘭氏陽性大桿菌，寬度在1μm或1μm以上，芽胞呈卵圓形，不突出菌體，多位于菌體中央或稍偏于一端。

　　能產生卵磷脂酶和酪蛋白酶，不發酵甘露醇和木糖。在MYP平板上為粉紅色菌落，周圍有粉紅色的暈;在酪蛋白瓊脂上菌落周

　　圍有透明圈。本菌在肉湯中生長渾濁，常微有菌膜或壁環，振蕩易乳化，在普通瓊脂平板上生成的菌落不透明、表面粗糙、似

　　毛玻璃狀或融臘狀、邊緣不齊。

　　將待試品用10倍梯度稀釋法稀釋至合適的濃度，MYP平板分離，37℃培養12～20小時，將疑似蠟樣芽胞桿菌的新鮮菌苔

　　置于無菌生理鹽水中，以1 McFarland的濁度管為標準對照，制備成1McFarland (約3.0×108cfu/mL )菌懸液，往每種微量生化

　　管內滴加2滴(約0.06mL)菌懸液。將已接種的西林瓶再套上膠塞，一般采用全加塞(如圖2左兩瓶所示)，特殊情況在下表

　　注明采用半加塞(如圖2右兩瓶所示)，直立于內托的凹槽內(如圖2)，或放置于合適的瓶架中，于35-37℃培養箱中培養，

　　結果觀察見表1。

　　注意：如有特殊的接種方式或培養時間，請詳見每種生化鑒定管附帶的使用說明。

　　四)蠟樣芽胞桿菌的生化分型和鑒定特征 (只供參考)

　　1. 蠟樣芽胞桿菌可根據對檸檬酸鹽利用、硝酸鹽還原、淀粉水解、V-P反應、明膠液化性狀的試驗，將該菌分成不同的型別。

　　本菌在生化性狀上與蘇云金芽胞桿菌極為相似，但后者可藉細胞內產生蛋白質毒素結晶體加以鑒別。其方法如下：取經30±1℃培養24±2h并于室溫放置3～4天的營養瓊脂(022022），適用于芽胞桿菌蛋白質毒素結晶體的形成)培養物少許于載玻片上,滴加蒸餾水混勻并涂成菌膜。經自然干燥,微火固定后,加甲醇作用30秒后傾掉,再通過火焰干燥,于載玻片上滴滿0.5%堿性復紅液,放火焰上加熱微見蒸氣(勿使染液沸騰)后持續1.5分鐘,移去火焰,更換染色液再次加溫染色30秒，傾去染液用自來水徹底清洗、晾干后油鏡鏡檢。觀察有無游離芽胞和染成深紅色的菱形、正方形或其它性狀的蛋白質毒素結晶體(如發現游離芽胞形成的不豐富,應將培養物置室溫2～3天再行檢查)，如有即為蘇云金芽胞桿菌，蠟樣芽胞桿菌檢查為陰性。